Responder:
Típicamente esta es una prueba de especificidad de anticuerpos.
Explicación:
En un ELISA es muy difícil saber si su anticuerpo se une o no a su proteína de interés, una proteína completamente diferente o un rango de proteínas.
La transferencia Western se usará para verificar la especificidad del anticuerpo (debe tener en cuenta que la transferencia Western puede no detectar todas las reacciones cruzadas con proteínas incorrectas).
En el Western blot, puede ver el tamaño de la proteína a la que se une el anticuerpo (no puede hacerlo en un ELISA). Por lo tanto, por ejemplo, si su anticuerpo debe unirse a una proteína de 56 kDa y ve una banda a ~ 56 kDa en la transferencia, entonces puede estar razonablemente seguro de que el anticuerpo se une a la proteína correcta.
Si, por otro lado, viera una banda a 32 kDa, podría concluir que el anticuerpo se está uniendo a la proteína equivocada. Del mismo modo, si muchas bandas aparecieran en la transferencia de Western, eso sugeriría (en ausencia de degradación de la proteína) que el anticuerpo se uniera a un rango de proteínas diferentes.
En el ejemplo de la banda de 32 kDa que aparece en el gel, y también en las bandas múltiples, sugeriría que el anticuerpo carece de especificidad para el ELISA y que cualquier resultado observado en el ELISA puede no ser específico para la proteína de interés.
Si me realizaron este tipo de prueba, podría incluir algún tipo de reactivo "interferente" para probar el anticuerpo. Por ejemplo, si hubiera elevado mi anticuerpo a un péptido, podría incluir el péptido en la solución del anticuerpo primario para probar la unión correcta. Es decir, en presencia del péptido I no debería verse ninguna banda o ningún resultado del ELISA, ya que mi anticuerpo primario no podría unirse debido a la presencia de un exceso del péptido.
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