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Para mantenerlos intactos …
Explicación:
Las enzimas de restricción se usan en cantidades MUY pequeñas, pero generalmente se compran en lotes un poco más grandes.
Si para nada más, por lo general prefiere hacer diferentes pruebas con el mismo lote. Por lo tanto, el lote comprado debe almacenarse durante un tiempo prolongado.
La mayoría de las enzimas son perfectamente felices en su tampón a 4 grados centígrados por un tiempo, pero eventualmente se degradarán. 24 horas suele ser el límite aceptado.
Para un almacenamiento a largo plazo, el lote debe ser congelado. -20C es el estándar, y lo mantendrá durante varios meses. Para períodos aún más largos (por ejemplo, uno o más años) -70C es la norma.
Es necesario congelarlo rápidamente, y en recipientes pequeños (por ejemplo, Eppendorfs) para evitar la descongelación / congelación con demasiada frecuencia.
Para evitar daños a la proteína a temperaturas tan bajas, se pueden / deben agregar estabilizadores, como DTT (Di-tio-Treitol), albúmina sérica y, lo más importante, glicerol (5 a 50%).
Por extraño que parezca, a -20 ° C es necesario usar 50% de glicerol, mientras que a -70-glicerol no es realmente necesario, aunque su adición puede ayudar a estabilizar la proteína …
Supongamos que trabaja en un laboratorio y necesita una solución ácida al 15% para realizar una determinada prueba, pero su proveedor solo envía una solución al 10% y una solución al 30%. ¿Necesitas 10 litros de la solución ácida al 15%?
Resolvamos esto diciendo que la cantidad de solución al 10% es x Luego, la solución al 30% será 10 x La solución deseada al 15% contiene 0,15 * 10 = 1.5 de ácido. La solución al 10% proporcionará 0.10 * x Y la solución al 30% proporcionará 0.30 * (10-x) Entonces: 0.10x + 0.30 (10-x) = 1.5-> 0.10x + 3-0.30x = 1.5-> 3 -0.20x = 1.5-> 1.5 = 0.20x-> x = 7.5 Necesitará 7.5 L de la solución al 10% y 2.5 L del 30%. Nota: Puedes hacerlo de otra manera. Entre el 10% y el 30% es una diferencia de 20. Debe aumentar del 10% al 15%. Esta es una diferencia de 5. Entonces,
Para realizar un experimento científico, los estudiantes necesitan mezclar 90 ml de una solución ácida al 3%. Disponen de una solución al 1% y al 10%. ¿Cuántos ml de la solución al 1% y de la solución al 10% deben combinarse para producir 90 ml de la solución al 3%?
Puedes hacer esto con ratios. La diferencia entre el 1% y el 10% es 9. Debe aumentar del 1% al 3%, una diferencia de 2. Luego, 2/9 de las cosas más fuertes deben estar presentes, o en este caso 20 ml (y de Por supuesto 70mL de las cosas más débiles).
¿Por qué es más importante que las enzimas de restricción reconozcan las secuencias palindrómicas?
A pesar de ser una endonucleasa, es decir, una enzima que digiere ácido nucleico, la endonucleasa de restricción no destruye al azar una molécula de ADN. Las enzimas cortan solo en las secuencias palindrómicas para formar fragmentos más pequeños de ADN. Las enzimas de restricción se utilizan para cortar moléculas de ADN circular de origen procariótico. Este tipo de endonucleasa a menudo produce extremos pegajosos que ayudan en la creación de ADN recombinante, es decir, se puede insertar un fragmento de ADN extraño (que contiene un gen deseado) en el corte. La tecnolog&