¿Qué es la cromatografía de intercambio iónico? + Ejemplo

¿Qué es la cromatografía de intercambio iónico? + Ejemplo
Anonim

Responder:

Es un proceso para separar diferentes proteínas en función de su carga y propiedades de unión a un material.

Explicación:

A diferentes pHs diferentes proteínas llevan diferentes cargas. Al colocar una mezcla de proteínas a un pH establecido, puede tener una mezcla que contenga proteínas con diferentes propiedades de carga.

Si esta mezcla de proteínas se vierte en una columna que contiene un material con una carga, la columna unirá las proteínas dentro de la carga opuesta.

Luego puede usar diferentes soluciones que contienen diferentes cantidades de iones para eluir (despegar) las proteínas de la columna.

Por ejemplo, supongamos que tiene una mezcla de proteínas de las que desea purificar una proteína en particular. Si supiera que a un pH particular su proteína de interés estaba cargada positivamente, podría verter la mezcla en una columna que contenía material cargado negativamente.

Todas las proteínas que no tenían carga, o cuando estaban cargadas negativamente, fluirían directamente a través de la columna. Luego, podría liberar su proteína cargada positivamente inundando la columna con iones positivos que completarían la carga negativa en la columna. Esta competencia entonces causaría que su proteína de interés se eluya.

Aquí hay un ejemplo de esto sucediendo.

Cada bandeja contiene un tampón a una concentración diferente y, como se puede ver en la muestra de 175 mM (esquina superior izquierda), muy poca proteína roja / marrón se ha unido a la membrana cargada, ya que ha habido una competencia entre los iones en el tampón y proteína para los sitios de unión cargados en la membrana (los iones en el tampón han "ganado" porque hay más de ellos y por lo tanto han evitado que la proteína se una). En la muestra de la parte inferior derecha, muchas proteínas se han unido a la membrana porque hay menos iones presentes para competir por los sitios de unión.

En este video se puede ver la cromatografía de intercambio aniónico en funcionamiento: