¿Por qué se usan DNasa y lisozima en pasos de lisis durante la purificación de proteínas?

¿Por qué se usan DNasa y lisozima en pasos de lisis durante la purificación de proteínas?
Anonim

Responder:

Para purificar la fracción de proteína …

Explicación:

Si está purificando una proteína (a menudo específica), tendrá que deshacerse de tanta basura como sea posible que podría estar vinculada a ellos.

Depende hasta cierto punto de qué proteína esté buscando, pero en general es una buena idea, especialmente en preparativo Purificación, para deshacerse de tantas impurezas como sea posible.

1:

Como las proteínas son generalmente grandes y, en consecuencia, aparecerán en las bandas más bajas de su fracción (ultracentrifugada), querrá deshacerse de cualquier ácido nucleico, especialmente si la proteína que está purificando se refiere a personas de la misma categoría. Pol1, La transcriptasa inversa o cualquier otra enzima involucrada en la Replicación / Transcripción / Traducción.

Puede separar los ácidos nucleicos presentes en la muestra utilizando una ADNsa: esto hidrolizará totalmente el ADN en sus partes constituyentes.

Hay que tener en cuenta que existen varias ADNsa, todas diferentes en su mecanismo y especificidad para su sustrato. Dependiendo de la ADNasa utilizada, puede mostrar cualquiera Endo- o Exo actividad nucleasa …

Más al punto, ARNasa es más adecuado, ya que el ARN suele estar más dentro del rango de flotabilidad / fracción de las proteínas, y puede unirse a la proteína.

2:

Lisozima: Una enzima que tiene al menos dos funciones:

Desglucosila las enzimas: la mayoría de las proteínas transportadas en el torrente sanguíneo son glicosiladas: tienen unas pocas moléculas de azúcar adheridas a ellas. La lisozima eliminará los residuos de azúcar.

También tiene la capacidad de descomponer la pared celular de las bacterias Gram-positivas, causando que lyse. (Si quieres purificar proteínas de bacterias Gram-positivas)

Cualquier producto degradado, ya sea ácido nucleico o residuos de azúcar, aparecerá en las fracciones superiores del tubo de centrífuga debido a su flotabilidad "más ligera" …