En la prueba ELISA, ¿qué hacen los anticuerpos primarios y los secundarios?

En la prueba ELISA, ¿qué hacen los anticuerpos primarios y los secundarios?
Anonim

Responder:

Eso depende del tipo de ensayo ELISA.

Explicación:

Elisa = Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas.

Hay diferentes tipos de ensayos ELISA. Lo que necesitas es:

  • anticuerpo con una enzima unida a él
  • antígeno al que se une el anticuerpo
  • Sustrato de la enzima que provoca una reacción medible.

los enzima unido al anticuerpo a menudo es HRP (peroxidasa de rábano picante). El HRP puede reaccionar con diferentes sustratos que cambian de color o emiten luz, ambos medibles.

La imagen muestra un resumen de la diferentes tipos de ensayos ELISA. Explicaré cómo funcionan a continuación.

ELISA directo

Una placa está recubierta con el antígeno (Ag) y una anticuerpo primario Con la enzima se añade. Cuando se agrega el sustrato, se producirá la reacción y es proporcional a la cantidad de interacciones anticuerpo-antígeno.

ELISA indirecto

Una vez más, una placa está recubierta con el antígeno y una anticuerpo primario Se une al antígeno. UNA anticuerpo secundario Se agrega que se une al primer anticuerpo. El segundo anticuerpo contiene la enzima que reacciona con el sustrato.

Sandwich ELISA

Aquí están involucrados dos o tres anticuerpos. Un anticuerpo de captura se une a las placas y se une al antígeno. A esto le siguen los mismos pasos que el método directo (solo un anticuerpo) o el método indirecto (dos anticuerpos).

Elisa competitiva

A veces llamado ELISA de inhibición, es un poco más complicado. Se recubre una placa con el antígeno a investigar. UNA anticuerpo primario con enzima se incuba primero con una muestra con una concentración desconocida del mismo antígeno. Luego se agrega a la placa, permitiendo que los anticuerpos que aún están libres reaccionen con el antígeno en la placa. Después de que los complejos de anticuerpo-antígeno de la muestra se eliminan por lavado, se agrega el sustrato.

Cuando la muestra desconocida tenga una gran cantidad de antígeno, habrá menos anticuerpos libres para unirse a la placa = señal inferior.