¿Por qué usamos un control negativo en la PCR?

¿Por qué usamos un control negativo en la PCR?
Anonim

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Vea abajo

Explicación:

PCR funciona a partir de una plantilla de ADN. Digamos que estás haciendo la prueba del VIH (el VIH es un virus de ARN, pero cuando se introduce en una célula, se convierte en ADN … por lo que habrá ADN del VIH en una célula infectada). Los cebadores que use harán un producto (amplicón) que corresponde a parte del ADN del VIH. Si ve este amplificador, entonces tiene presente la secuencia de VIH … pero si no tiene un control negativo, puede haber contaminación.

La PCR es extremadamente sensible. Existen muchas soluciones utilizadas en la PCR (agua, tampón, dNTP, enzima) … y todas pueden contaminarse fácilmente con el ADN de otras muestras, o incluso del amplicón que se produjo en la reacción que se produjo ayer. Por lo tanto, si tiene una muestra de ADN del Paciente X y está revisando el VIH mediante PCR, los cebadores de la PCR pueden hacer que un producto salga del ADN del VIH en la muestra de ADN del Paciente X (si esa persona tiene VIH), o puede hacerlo contaminación. Pero no se puede saber si es por contaminación o por VIH en el ADN de los pacientes.

Así que tienes un control de agua El tubo 1 coloca todos los componentes de la reacción, y para el ADN solo se agrega agua. Este es el control negativo. NADA debe amplificar aquí. En el tubo 2 se ponen todos los componentes de la reacción y el ADN del paciente X. Si obtiene un producto aquí (y nada en el Tubo 1), el Paciente X probablemente tiene el ADN del VIH en su ADN. Si obtiene un producto tanto en el Tubo 1 como en el Tubo 2, tiene un problema de contaminación y no puede saber si el VIH en la muestra del paciente proviene de la enfermedad o de la contaminación.

Así que siempre se ejecuta un control de agua (agua en lugar de ADN).